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亲和标签抗体系列的试用装勾当来啦!!

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◆DYK标签:DYKDDDDK


DYK标签是辨认DYKDDDDK肽链的单抗。可用于检测大肠杆菌、酵母、哺乳植物细胞中抒发的DYKDDDDK标签融会卵白。


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将抒发3×DYKDDDDK标签融会卵白A的质粒转染至HEK293细胞中,颠末24 h培育后,随机拔取此中的克隆细胞。将拔取的克隆细胞用RIPA缓冲液停止裂,对所得的细胞消融液用Western blotting检测。

别离用Wako(克隆号 1E6)(产物编号:)抗体和A公司抗体停止Western Blot检测。

与A公司抗体比拟,Wako(克隆号 1E6)抗体辨认DYKDDDDK的特同性更高。





A公司产物和Wako产物在Western blotting检测中的活络度比拟


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Lane 1:293T细胞消融液

Lane 2:刹时抒发卵白A-DYKDDDDK的293T细胞消融液

Lane 3:刹时抒发卵白B-DYKDDDDK的293T細胞消融液

封锁:含5% 脱脂奶的TBS-T、4℃,留宿

抗体反映:2 h、室温

发光剂:ImmunoStar® LD

检测:LAS-3000、暴光时候15 min

Wako 1E6-HRP比A公司产物有更高的活络度!!



◆PA标签体系 标签序列【GVAMPGAEDDVV】

 

● 超高亲和性抗体,完成高收受接管率、高纯度纯化

● 经由过程树脂再生,下降运转本钱

● 在植物细胞抒发系(HEK293T细胞、CHO细胞等)中,有用纯化卵白

● PA标签体系是利用可辨认肽标签(12个氨基酸残基)的单抗(NZ-1)。Wako开辟了对应的亲和性纯化标签体系。

● NZ-1单抗对PA tag具备高亲和性和特同性,可利用于Western blotting、细胞流式阐发、免疫组化(ICC)。

   经由过程免疫积淀,可纯化PA标签融会卵白和树脂再生。

● PA标签体系,可一步纯化高纯度PA标签融会卵白。



利用案例:Western blotting


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Lane 1

一抗:抗IDH1抗体(RcMab-1), 1 μg/mL

二抗:抗大鼠IgG-HRP标签, 1000倍浓缩

 

 Lane 2

一抗:抗PA tag抗体, 1 μg/mL

二抗:抗大鼠IgG-HRP标签, 1000倍浓缩

 

Lane 3

一抗:抗DYKDDDDK标签抗体, 3.5 μg/mL

二抗:抗小鼠IgG-HRP标签, 1000倍浓缩

 

上样量:各10 μg

暴光时候:10 min



◆6×His标签:HHHHHH (6×His)


可用于检测His(6×His)标签融会卵白。克隆号差别,辨认真个特同性、利用也有所差别。



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克隆号

辨认端

Western blotting

Immunoprecipitation

ELISA

产物编号

N端

C端

N端

C端

9F2

C端

ND

+++++

ND

++

-

010-21861

21-48

N端及C端

+++

++++

+++

+++

017-23211

28-75

N端及C端

++

++

+++++

+++++

014-23221



B公司产物和Wako产物各克隆号的Western blotting检测功效比拟


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N端His:HEK293T抒发的6×His-Protein Z, 1×105 cells

C端His:Protein P-6×His+CHO细胞消融液, 1×105 cells

一抗:1 μg/mL

二抗:抗小鼠IgG抗体, 5000倍浓缩液

可确认其具备比B公司产物划一乃至更高的活络度。



GFP tag: Green Fluorescent Protein (GFP)


  可辨认Green Fluorescent Protein(GFP)的抗体。GFP是可实时检测方针卵白部分或细胞、细胞器中的标签卵白,可利用于各个研讨范畴。

 


c-Myc标签:EQKLISEEDL


可辨认人c-Myc 来历(410-419aa)多肽EQKLISEEDL单抗。


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抗c-Myc, 单抗()

抗体浓度:0.25 μg/mL

抗原量:对10 ng c-Myc标签重组卵白停止电泳操纵。

用10000倍浓缩的抗小鼠IgG-HRP抗体停止检测。



GST标签:Glutathione-S-transferase


可辨认Glutathione S-transferase(GST)单抗。

 

 

亲和性标签抗体连系琼脂糖珠


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<利用载体量>

抗DYKDDDDK标签抗体琼脂糖珠(Wako): 20 μL/assay

A社 Affinity Beads: 20 μL/assay


<抗原增加量>

含DYKDDDDK标签融会卵白的大肠杆菌细胞裂解液20 mg/assay


<免疫积淀前提>

4℃、3 h


<洗脱体例>

150 ug/mL DYKDDDDK肽 (产物编号:044-30951) 20 μL/assay

→ 4℃、孵化30 min

增加20 μL/assay 的2% SDS sample buffer → 煮沸5 min。


<SDS-PAGE>

样品电泳量:10 μL


<检测体例>

银染法

配制可适量抒发DYKDDDDK标签融会卵白(约19 kDa)的大肠杆菌裂解液,别离用本产物和A公司产物免疫积淀后,用DYKDDDDK肽停止抗原洗脱。将获得的抗原样品用SDS-PAGE分手、银染色后,比拟抗原收受接管率。


可确认比A公司产物具备划一乃至以上的抗原收受接管机能!!



◆产物列表


产物编号

产物称号

利用

子类
克隆号

包装
(试用)

高特异单抗

Anti 6×Histidine, Monoclonal Antibody(9F2)
6×His单抗(9F2)

WB

小鼠IgG1
9F2

20 μg

Anti 6×Histidine, Monoclonal Antibody(28-75)
6×His单抗(28-75)

WB,IP

小鼠IgG3・κ
28-75

20 μL

Anti 6×Histidine, Monoclonal Antibody(21-48)
6×His单抗(21-48)

WB、IP、ELISA

小鼠IgG1・κ
21-48

20 μg

Anti DYKDDDDK tag, Monoclonal AntibodyD
YKDDDK标签单抗

WB、IP、FCM、ChIP

小鼠IgG2b
1E6

20 μg

ANTI c-Myc, Monoclonal
Antibodyc-Myc单克隆抗体

WB、IP

小鼠IgG1
9E10

20 μg

Anti Green Fluorescent Protein, Monoclonal Antibody (Anti GFP,   MoAb)
绿色荧光卵白单克隆抗体

IHC

小鼠IgG2・κ
mFX73

20 μL

HRP标记单抗

Anti c-Myc, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated
过氧化物酶标记的c-Myc单抗

WB

小鼠IgG1
9E10

10 μL

Anti DYKDDDDK tag, Monoclonal Antibody, Peroxidase   Conjugated
过氧化物酶标记的DYKDDDK标签单抗

WB

小鼠IgG2b
1E6

10 μL

Anti 6×Histidine, Monoclonal Antibody(9C11), Peroxidase   Conjugated
抗6×His,单克隆抗体(9C11),过氧化物酶偶联

WB

小鼠IgG1
9C11

10 μL

Anti Glutathione S-transferase, Monoclonal Antibody, Peroxidase   Conjugated
抗谷胱甘肽S-转移酶,单克隆抗体,过氧化物酶偶联

WB

小鼠IgG2b
5A7

20 μL

Anti PA tag, Rat Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated
抗 PA 标签, 大鼠 单克隆 抗体, 过氧化物酶标记

WB

大鼠IgG2a
NZ-1

20 μL

抗体连系琼脂糖珠

Anti DYKDDDDK tag Antibody Beads
抗DYKDDDDK标签抗体琼脂糖珠

IP

小鼠IgG2b
1E6

200 μL

Anti 6×Histidine Antibody Beads
抗6×His抗体琼脂糖珠

IP

小鼠IgG3・κ
28-75

400 μL

Anti HA Antibody Beads
抗HA抗体琼脂糖珠

IP

小鼠IgG1
4B2

200 μg



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